针灸对IL2－IFN－NK调节网与其相关网Mφ－IL1－Th的影响及抑瘤效应
——针灸对相关网Mφ－IL1－Th与抗癌（H22）淋巴道转移效应

陕西中医学院 　　 马振亚胥 冰张登峰王 刚

[摘要]目的进一步观察针灸和针刺对相关网Mφ－IL1－Th与抗癌（H22）淋巴道转移的效应。方法 针灸和针刺癌（H22）淋巴道转移造型小鼠的大椎、关元二穴后，取样，以Mφ吞噬中性红比色分析法、Mφ上清液IL1含量MTT比色分析法、Th单抗SPA－Ig花环法及肾门淋巴结与肾重、肺重、肺表面瘤结节数等进行分析。结果 针灸和针刺组对免疫网络指标均较对照组显著增强（P<0.01）,并显示出抗H22淋巴道转移效应。结论 本次和以往多次实验研究表明，针灸在正向调节机体主要免疫调节网与相关网的作用下，以抗御和减轻致病因子的危害。这是我们在针灸免疫机理研究中所提出的新概念。

关键词：针灸巨噬细胞（Mφ）白细胞介素1（IL－1）辅助性T细胞（Th）

腹水型肝瘤细胞（H22）癌（H22）淋巴道转移

EFFECTS OF ACUMOXI ON IL2-IFN-NK IMMUNOREGULATORY NET- WORK AND ITS RELATED MACROPHAGE-IL1-Th NETWORK AND ON TUMOR*

——Observation on the Effect of Acumoxi on the Macrophage-IL1-

Th Network and on the Metastasis of Hepatoma

MA Zhenya (马振亚）XU Bing(胥冰）ZHANG Deng-feng(张登峰）Wang Gang(王刚)

Research Section of Immunology of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Shaanxi,College of TCM,Xianyang 712083,China

[ABSTRACT] Objective:To observe the effect of acumoxi (acupuncture and moxibustion) on macrophege (Mφ)-IL1-Th networkandhydroperitoneum hepatoma(H22) metastasis in mice.

Methods:A total of 36 BALB/c male mice bearing H22 are randomly divided into control, acu-

*国家自然科学基金项目（38970885）

*The project supported by National science Foundation of China(38970885)

puncture and acumoxi groups with 12 cases in each group. In the later 2 groups, Dazhui(GU14)

and Guanyuan(CV4) are punctured once daily, continuously for 18 days, and in acumoxi group , the two acupoints were also moxibustioned altematively with moxa stick once every day. After killingthe mice, the tissue samples of the 3 groups are treated routinely step by step and analyzed by means of colorimetric analysis for determining the phagocytic function of the macrophages; and the content of IL1 of the Mφ supematant is assayed with serum plate aggiutination(SPA)-lg floral hoop method of T helper cell(Th) monoclonal antibldy; the weight of the reniportal lymph node, the kidney and the lung, and the number of the cancerous nodes on the pulmonary surface are calculated .Results:After acupuncture and moxibustion treatment, the immunoregulatory network indices of acumoxi group increase obviously compared with those of control group(p<0.01), showing an antimetastasis effect of acumoxi on H22. Conclusion: Results of the present study and those of our former research prove that acupuncture and moxibustion can suppress the tumor growth and H22 metastasis by the enhancement of the immunoregulatory network.

Key WordsAcupuncture and Moxibustion Macrophage(Mφ)Interleukin(IL1)

T Helper cell(Th) Hydroperitoneum hepatoma (H22)

近年研究显示，应用针灸治疗肿瘤，不仅具有缓解癌症疼痛，改善放化疗副反应等作用，而且具有提高患者机体免疫功能和抑制肿瘤生长的作用[1，2]。但在本课题范围内的研究则较少见甚或未见，下面则是这方面的初步实验研究报告。

1．材料与方法

1.1材料

1.1.1瘤株小鼠腹水型肝癌株（Hydroperitoneum Hepatoma,H22)，由第四军医大学实验动物研究中心提供。

1.1.2 主要试剂 PRMI-1640为Gibco 公司产品。脂多糖（LPS）、PHA为Sigma公司产品。MTT为Fluka 公司产品。L3T4单克隆抗体（McAb）由北京医科大学免疫学研究室提供。冻干SPA菌菌体试剂由上海生物制品研究所提供。

1.1.3 实验动物BALB/c小鼠，均为雄性，体重22±1g，由第四军医大学实验动物研究中心提供。

1.2 方法

1.2.1 瘤细胞接肿取接种H22第10天小鼠腹水癌细胞，制为悬液，给实验小鼠右下肢爪垫内侧皮下注射0.05ml(5×106/ml)。

1.2.2 实验动物分组将36只荷瘤小鼠按随机分组原则分为3组：对照组、针灸组、针刺组，每组各12只。

1.2.3 针灸穴位与方法取大椎、关元二穴，按大动物比较解剖学的相同部位定穴。针刺：大椎穴，直刺进针，向上斜刺，深度2～3mm。关元，直刺进针，深度1～1.5mm。二穴分别隔日交替进行，日一次，行平补平泻，行针10次，频率60次/min，留针3min。艾灸：剪去穴位区被毛，以特制小艾条施灸。二穴分别隔日交替艾灸，日一次，每次3min。针灸组针刺与艾灸并施，针刺组仅施针刺，对照组除不进行针灸外，其余操作均与针灸组相同，共18日。第19日同步采取所需样品，进行检测。

1.2.4腹腔Mφ吞噬功能的测定在贴壁的腹腔Mφ100μ/孔中（2×106/ml），加入0.075%中性红溶液100μ/孔，混合培养15min后去上清，以PBS液离心洗3遍，加二甲基亚砜100μ/孔，待细胞溶解后，在酶标仪490nm处测定OD值[4]。

1.2.5腹腔Mφ产生IL1的测定在贴壁的腹腔Mφ100μ1/孔中（2×106/ml），加入LPS溶液（10mg/L）10μ1/孔，混合培养，48h后，吸取上清液，做1：8、1：16稀释，分别吸取100μ1，加入细胞培养板孔中。再于其中加入健康BALB/c小鼠胸腺细胞悬液（含FBS20%，PHA3mg/L）100μ1/孔(1×1010/ml).培养68h后,吸去上清100μ1,加入MTT(含5g/L MTT的PBS液)10μ1/孔.培养4h后,加二甲基亚砜100μ1/孔,待细胞溶解后,在酶标仪490nm处测OD值[4]。

1.2.6 Th细胞(L3T4)的测定按马振亚提出的摘小鼠眼球取血,以淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,其余按我们常规法进行。

1.2.7 抗癌（H22） 淋巴道转移效应检测

将实验小鼠处死后，剥取右侧肾门淋巴结与肾及全肺。

1.2.7.1 在分析天平上称取其重量，进行实验组与对照组之比较。

1.2.7.2将肺分别固定于Bouin液中48h后，在体视显微镜（XTT型，上海奋进仪器厂）下计数肺表面瘤结节数，进行实验组与对照组之比较。并显示出各组出现瘤结节之鼠数，计算出肺转移率。

1.2.8 数据处理与显著性表示实验结果数据均用x±s表示，统计学处理采用方差分析q检验。P<0.05和P<0.01为差异有显著性。

2．实验结果

2.1 针灸对荷瘤小鼠腹腔Mφ吞噬功能的效应

结果见表1。由表可见，针灸组和针刺组

Mφ吞噬功能与对照组比有极显著性差异。

表1针灸对荷瘤小鼠腹腔

吞噬功能的效应 （x±s）

注：与对照组比较，*P<0.01

其余两组比较，p>0.05

2.2针灸对荷瘤小鼠腹腔Mφ产生IL1的效应

结果见表2。由表可见，针灸组小鼠IL1含量与对照组比有极显著性差异。

表2 针灸对荷瘤小鼠腹腔Mφ

产生IL1的效应（x±s）

注：与对照组比较，*P<0.01**P>0.05

其余两组比较在1：8时P<0.01，1：16时，P>0.05

2.3针灸对荷瘤小鼠Th细胞（L3T4）的效应

结果见表3。由表可见，针灸组和针刺组Th细胞（L3T4）百分率与对照组比有极显著性差异。

表3针灸对荷瘤小鼠Th细胞（L3T4）

的效应（x±s）

注：与对照组比较，*P<0.01

其余两组比较， P>0.05

2.4针灸抗癌（H22）淋巴道转移的效应

结果见表4。由表可见，除针刺组肺重，肾门淋巴结与肾重未显示出明显差异外，针灸和

针刺两组均显示出明显的抗癌（H22）淋巴道转移效应。

表4 针灸抗癌（H22）淋巴道转移的效应

注：与对照组比较*P<0.01△P<0.05**P>0.05

其余两组比较，除肾门淋巴结P<0.01外，余均P>0.05

3.讨论

3.1针灸抗癌（H22）淋巴道转移和IL2-1FN-NK调节网与其相关网Mφ-IL1-Th

癌侵袭和转移是肿瘤致病的关键性因素，也是治疗肿瘤的关键性问题。但进行针灸对IL2-IFN-NK调节网的相关网Mφ-IL1-Th与抗癌（H22）淋巴道转移效应研究的公开报道则较少见。叶向荣等[3]观察了艾灸神阙穴的抗癌（H22）作用，结果表明间日灸的效果较明显。在免疫功能方面，可提高小鼠胸腺指数。在抗癌方面，接肿瘤细胞侧的肾门淋巴结重量明显减少，肺表面癌结节数也明显减少（与对照组比P<0.01）。他们虽采用了单一的艾灸和单一的神阙穴，但在后一方面，与我们本次所观察的结果相一致，这均为艾灸或针灸在抗肿瘤效应的研究方面提供了实验依据。

我们本次实验初步证明，针灸小鼠大椎和关元二穴，呈现出相关网Mφ-IL1-Th的增强与抗癌（H22）淋巴道转移的正相关效应。另外，我们多次实验研究证明，针灸机体一定的穴位，具有正向调节IL2-IFN-NK免疫调节网与其相关网Mφ-IL1-Th的效应，并具有明显的抑瘤（H22、HAC、S37、S180等）效应[5～8]。这表明针灸防治肿瘤与免疫的研究应是当前的一个重要课题。

我们所进行的针灸对IL2-IFN-NK调节网的相关网Mφ-IL1-Th影响研究中，Mφ是机体抗肿瘤的重要组成环节，活化的Mφ对肿瘤细胞产生毒性，却对正常细胞无害。IL1可促进T细胞增殖，并能协同IL2、IFN-γ等诱导NK、CTL杀伤活性，进而对抗肿瘤。Th细胞可依赖抗原提呈细胞如Mφ提呈相关的肿瘤抗原，经特异性激活后，分泌多种淋巴因子，继而激活CTL、Mφ、NK等细胞，间接发挥抗肿瘤作用。以上说明针灸对IL2-IFN-NK调节网与其相关网Mφ-IL1-Th所发挥的效应在防治肿瘤方面的重要意义。

3.2针灸“大椎”、“关元”二穴的意义

“大椎”为督脉经穴，位于手足六阳经与督脉交会之处，总督一身之阳，故有“诸阳之会”的称谓。具有振奋人体阳气、强壮保健等功能。故针灸大椎穴，可振奋阳气，祛邪外出，增强体质，防治疾病。我们多次实验证明[5～8]，以本穴为主，配以其他穴位，施以针灸，均能增强IL2-IFN-NK免疫调节网与其相关网Mφ-IL1-Th的活性及抑瘤效应。

“关元”又名下丹田，为一身元气之所在，是生化之源。具有培肾固本，调气回阳，主元气等功能。元气是人体脏腑机能活动的原动力，是生命的根本，故针灸关元穴，可培补元气，增强脏腑机能活力，驱除病邪。我们前一实验[5]和本次实验均证明，以大椎和关元二穴相配，施以针灸，均能增强IL2-IFN-NK免疫调节网的相关网Mφ-IL1-Th的活性及抑瘤效应。

3.3 祖国针灸医学免疫机理新概念的探讨

根据本次和以往多次实验研究结果，我们提出的针灸免疫机理新概念已概括性的表述于摘要的结论中，具体言之，则谓：“对IL2-IFN-NK免疫调节网与其相关网Mφ-IL1-Th的正向调节，是针灸对机体发挥完整正向免疫调节作用的基础。在此基础上，机体调动相关细胞和免疫因子，发挥更加广泛和强有力的免疫作用，以抗御和减缓致病因子的危害”的新概念。

参考文献

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4．顾立刚，古宇怀，李乐长，等.长期激怒刺激对大鼠全血粘度和巨噬细胞功能影响的研究[J]。北京中医药大学学报，1997；20（2）：28

5．马振亚，胥冰，施京红.针灸对IL2-IFN-NK调节网与其相关网Mφ-IL1-Th及抑瘤效应-电针艾灸对相关网Mφ-IL1-Th与抑瘤（H22）效应[J].中华医学研究与创新杂志，2002；1（4）：64

6． Ma Zhenya, Fan Qingsheng, Zhang Dengfeng. Effect of Acupuncture on IL2-IFN-NK Immun- oregulatory Network in Mice with Trans- plantedHepatocaricinoma[J].World Jor- rnal ofAcupuncture Moxibustion, 2002; 12(1):31

7. Ma Zhenya, Fan Qingsheng, Wang Yimin.App-roach to the Function of Acupuncture in Increase the IL2-IFN-NK Regulatory Network of Mice with S180 Sarcoma and the Mechanism of Acupuncture to AIDS Treatment[J].American Journalof Oriental Medicine Research,1998;1(2):79

8.Ma Zhenya,Wang yimim,Fan Qingsheng.Effect of Acupuncture on IL2-IFN-NK Regulatory Network and Sarcoma[C].Abstract of8th International congress of Immunolog(Hungary),1992;428

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